ELISA-testen oppdager mange sykdommer, og det er derfor den har funnet bred anvendelse innen medisin og mer. ELISA-testen er imidlertid best kjent for sin diagnose av Lyme-sykdommen. Hva er ELISA-testen? Hvordan tolker man resultatene? Hva er prisen på testen?
Innholdsfortegnelse:
- ELISA-test - hva oppdager den? Bruk av ELISA-testen
- ELISA-test - hva er testen?
- ELISA-test og borreliose - når skal du utføre?
- ELISA test - pris. Hvor mye koster en ELISA-test?
- ELISA test - resultater. Kan de være falske positive?
- ELISA test - resultater. Kan de være falske negative?
ELISA-testen, dvs. den enzymbundne immunosorbentanalysen, er en ofte brukt laboratoriemetode som tjener bl. for kvantitativ påvisning av antistoffer i blodet.
Av denne grunn har ELISA-testen blitt brukt til diagnostisering av bakterielle sykdommer, som Lyme borreliose.
Fordelen med ELISA-metoden er dens enkelhet og muligheten for rask implementering samt høy følsomhet. ELISA-metoden utføres ved bruk av spesielle plastplater med brønner fylt med for eksempel Borrelia-proteiner (antigener) og spesifikke monoklonale antistoffer, som er designet for å oppdage antistoffer i pasientens prøve.
ELISA-test - hva oppdager den? Bruk av ELISA-testen
Den høye følsomheten og enkelheten til ELISA-metoden gjorde det anvendelig i diagnosen av mange sykdommer, men det er best kjent som den diagnostiske metoden for Lyme-sykdommen.
I tilfelle diagnosen Lyme borreliose, den såkalte indirekte ELISA, som gjør det mulig å oppdage spesifikk IgM eller IgG i det testede materialet. På samme måte kan antistoffer oppdages for diagnose:
- virusinfeksjoner: herpesvirus (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, hepatittvirus (HBV og HCV)
- protozoinfeksjoner: toksoplasmose, giardiasis
- autoimmune sykdommer: cøliaki (anti-tTG eller anti-DPG antistoffer), Hashimotos sykdom (anti-TG og anti-TPO antistoffer), inflammatoriske tarmsykdommer (anti-ASCA og anti-ANCA antistoffer)
- parasittiske sykdommer og allergier der det påvises spesifikke IgE-antistoffer. Deres økte nivå kan indikere tilstedeværelse av allergier, for eksempel til pollen og mat, eller parasittangrep (væpnet bendelorm, menneskelig rundorm)
Det er også modifiseringer av ELISA-metoden (den såkalte sandwich-ELISA), som tillater påvisning av en prøve av proteiner annet enn antistoffer. Da er målet med testen å oppdage i det biologiske materialet:
- fragmenter av virus eller bakterier, ofte er de antigener som er karakteristiske for et gitt patogen
- serumhormoner, f.eks. østrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortisol
- enzymer, for eksempel calprotectin, bukspyttkjertel elastase, alkalisk fosfatase
- svulstmarkører, for eksempel CA-125
- tilstedeværelsen av medisiner i serumet
Denne metoden er også anvendbar i næringsmiddelindustrien, der den kan oppdage spor av allergener (f.eks. Melk, peanøtter), GMO eller giftstoffer i maten.
ELISA-test - hva handler det om?
Diagnosen av for eksempel Lyme borreliose ved bruk av ELISA-metoden består i å påvise immunproteiner i biologisk materiale - antistoffer som oppstår under responsen mot Borrelia-antigener.
Antistoffene testes i to klasser, IgM og IgG. IgM er de første antistoffene som dukker opp i kroppen når de kommer i kontakt med bakterier, og de avtar over tid.
Deres plass er inntatt av mer vedvarende IgG-antistoffer som kan forbli i kroppen i flere dusin år.
På denne måten blir tilstedeværelsen av bakterier i kroppen indirekte testet ved å oppdage antistoffer spesielt rettet mot Borrelia spirocheter.
Antistoffer i forskjellige infeksjonsstadier kan være rettet mot en rekke Borrelia-proteiner. For eksempel er det tidlig p41-proteinet.
I de senere stadiene begynner det å dukke opp flere og flere proteiner, som p21, p30, p39, p43. Dette er grunnen til at diagnosen Lyme sykdom er ekstremt vanskelig.
Utvalget av bakterieproteiner er ekstremt viktig for at testen skal ha en høy diagnostisk verdi. Derfor bør rutinemessig ved diagnosen Lyme-sykdom brukes ELISA-tester fra II-generasjon eller III-generasjon der proteinsett er valgt for å oppnå det mest pålitelige resultatet.
ELISA-test og borreliose. Når skal jeg gjøre?
Lyme borreliose er en bakteriell sykdom forårsaket av bakteriene Borrelia burgdorferi og dens mange varianter.
Diagnosen av sykdommen er ikke lett på grunn av kompleksiteten i immunresponsen mot Borrelia og ufullkommenhetene i laboratoriemetoder.
Den mest brukte laboratoriemetoden er den høysensitive ELISA-metoden, som oppdager spesifikke antistoffer oppvokst mot bakterieproteiner.
Ved diagnosen Lyme-sykdom brukes den indirekte ELISA-metoden der følgende trinn skilles ut:
- inkubasjon av brønnene på platen med materiale samlet fra pasienten, f.eks. serum. Hvis det er antistoffer mot Borrelia i det testede materialet, binder de seg til proteiner i bunnen av reaksjonsbrønnen
- deretter skylles overflødig serum ut med en spesiell vaskevæske (buffer) og den såkalte konjugat, dvs. et antistoff koblet til et enzym som binder til tidligere koblede antistoffer i reaksjonsbrønnene
- deretter tilsettes substratet for konjugatet og en farreaksjon oppstår (positivt resultat) eller ingen farreaksjon (negativt resultat)
- det siste trinnet er leserens (spektrofotometer) lesing av konsentrasjonen av antistoffer mot Borrelia i pasientens serum
ELISA-testen for Lyme-sykdom utføres fra blod, og i tilfelle nevrologiske symptomer (neuroborreliose), også fra hjernevæsket.
Synovialvæsken bør ikke testes, da det er stor sannsynlighet for falske positive resultater.
Grunnlaget for diagnosen av sykdommen er kliniske symptomer som indikerer det, bekreftet av resultatene fra laboratorietester.
Tilsetting av et laboratorietestresultat uten symptomer tillater ikke diagnosen Lyme-sykdom, da det er vist at antistoffer mot Borrelia også påvises hos friske mennesker.
Serologisk diagnose av Lyme borreliose begynner med en semikvantitativ screening ELISA-test. Hvis resultatet er negativt, betyr det at ingen Borrelia spirocheter har blitt oppdaget, eller resultatet er falskt negativt.
Hvis resultatet er positivt eller svakt positivt (tvetydig), bør det utføres bekreftende Western blot-testing, som er preget av høy spesifisitet.
Dette er for å bekrefte at ELISA-resultatene er "sanne". Under diagnostikk kan du ikke hoppe over noen av trinnene ovenfor, og for eksempel utføre en diagnose med Western blot-metoden umiddelbart eller stille en diagnose basert på et positivt ELISA-resultat alene.
I Polen slutter diagnosen av borreliose ofte på det første screeningstadiet, noe som forårsaker feiltolkning av positive eller svakt positive resultater.
Anbefalt artikkel:
Lymfocyttransformasjonstest (LTT) Godt å viteELISA test - pris. Hvor mye koster en ELISA-test?
Testen koster ca PLN 60 og gjøres med en gang. Du kan imidlertid vente i omtrent tre måneder på resultatene av henvisningen.
ELISA test - resultater. Kan de være falske positive?
Falske positive resultater er resultatet av kryssreaktivitet av IgM-antistoffer med andre proteiner. Antistoffer produsert av kroppen kan 'feilaktig' gjenkjenne et antigen fra andre mikroorganismer som Borrelia-antigenet.
De vanligste "feilene" forekommer hos personer smittet med treponema pallidum, herpesvirus og hos personer med systemisk lupus erythematosus og andre revmatiske sykdommer.
ELISA test - resultater. Kan de være falske negative?
Falske negative resultater kan vises på et tidlig stadium av infeksjonen, i så fall bør testen gjentas etter ca 3-4 uker. Dette kalles serologisk vindu, det er den første infeksjonsperioden der kroppen ennå ikke har "klart" å produsere spesifikke antistoffer.
Likeledes hos mennesker med immunsvikt som ikke produserer nok antistoffer.
Et stort problem, spesielt ved svært intense infeksjoner, er utseendet til den såkalte immunkomplekser som består av Borrelia spirochetes antigener og antistoffer som er spesifikke for dem.
Som et resultat blir antistoffene "usynlige" for vanlige metoder som ELISA, og selv om de er tilstede i det testede materialet, kan de ikke påvises.
I slike tilfeller kan laboratoriet bruke nedbrytning av immunkomplekser. Denne behandlingen er designet for å frigjøre antistoffene. Imidlertid er denne metoden ikke mye brukt på grunn av mangel på standardisering i laboratorier.
Verdt å viteHvorfor er diagnosen Lyme sykdom ikke lett?
Dette er på grunn av kompleksiteten i immunresponsen mot Borrelia og begrensningene i laboratoriemetoder. Mangfoldet av varianter og fremveksten av nye som forårsaker infeksjoner, spesielt på det europeiske kontinentet, letter ikke utviklingen av effektive diagnostiske metoder.
Flere varianter har nylig dukket opp i Europa, som Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana og Borrelia spielmanii. I tillegg kan Borrelia spirochetes i kroppen bli til cyster eller bli på steder i kroppen utilgjengelige for celler i immunsystemet.
Å være dermed "usynlig" for immunforsvaret. I tillegg har det blitt vist at vevet kan inneholde fragmenter av bakterier som har sterkt proinflammatoriske egenskaper. De antas å være ansvarlige for de kroniske symptomene på Lyme sykdom, til tross for negative laboratorietestresultater.
Litteratur
1. Witecka-Knysz E. et al. Lyme sykdom: hvorfor er diagnosen så vanskelig? Laboratoriediagnostiker april 2007.
2. Moore A. et al. Nåværende retningslinjer, vanlige kliniske fallgruver og fremtidige anvisninger for laboratoriediagnose av borreliose, USA. Emerg Infect Dis. 2016 jul; 22 (7).
3. Laboratoriediagnostikk av flåttbårne sykdommer.Anbefalinger fra arbeidsgruppen: National Chamber of Laboratory Diagnosticians, National Institute of Public Health-National Institute of Hygiene, National Consultant in the field of infectious sykdommer, Department of Infectious Diseases and Neuroinfections, Medical University of Białystok, Polish Society of Virology, Warszawa 2014
4. Hosseini S. et al.: Enzym-linked Immunosorbent Assay (ELISA) Fra A til Z. Springer 2017.
